液相色谱仪的校准是一项复杂而重要的工作,需要严格按照操作规程进行,以确保仪器的准确性和可靠性。定期进行校准可以及时发现和解决仪器存在的问题,保证分析结果的质量,为科研和生产提供可靠的数据支持。
1.紫外检测器校准
-波长准确性校准:使用具有已知吸收波长的标准物质,如重铬酸钾的硫酸溶液。将检测器与记录仪联好,接通电源稳定后,先将检测波长调至特定波长,如235nm,然后用流动相将标准物质注入检测器,得到其吸收曲线。记录实际波长,与标准波长进行对比,计算出波长示值误差。重复测定多次,取各点差值即为波长重复性误差。
-灵敏度校准:配制一系列不同浓度的标准溶液,在选定的波长下分别进行检测。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据标准曲线的斜率和线性范围,评估检测器的灵敏度是否符合要求。如果灵敏度不足,可能需要调整灯的能量输出或更换老化的灯泡等。
2.荧光检测器校准
-激发波长和发射波长校准:选择一种荧光特性已知的标准物质,如罗丹明B溶液。将荧光检测器的激发波长和发射波长分别调至该标准物质的发射波长附近,然后进行扫描。记录荧光强度随波长变化的光谱图,确定实际的激发波长和发射波长与标准值的差异,并进行相应的调整。
-灵敏度和线性范围校准:制备不同浓度的标准荧光溶液,在固定的激发波长和发射波长下进行检测。绘制荧光强度与浓度的标准曲线,检查其线性范围和相关系数。根据校准结果,对检测器的增益、狭缝宽度等参数进行优化,以提高检测的灵敏度和准确性。
液相色谱仪的使用注意事项:
-在进行任何校准操作之前,请务必遵守操作手册和安全指南。
-确保实验室内通风良好,以避免有害气体的积聚。
-佩戴适当的个人防护装备,如手套、护目镜等。
-确保实验室内的温度和湿度稳定,避免对仪器性能产生不利影响。
-避免在有强烈振动或电磁干扰的环境中使用。
-定期清洁和维护,包括更换滤网、清洗流路等。
-检查仪器的密封件和接头是否紧固,防止泄漏。
-遵循制造商的建议进行仪器的保养和维修。
-使用高纯度的试剂和溶剂,避免引入杂质或干扰物。
-确保样品溶液的制备准确无误,避免浓度误差。
-对于易挥发或不稳定的样品,请采取适当的保存措施。
-准确记录所有校准数据和结果,以便后续分析和比较。
-如果发现异常数据或偏差较大的情况,请及时排查原因并重新校准。